Обнаружение каротина в говяжьем жире хроматографическим методом

Хроматографический метод был создан в 1903 г. нашим соотечественником М. С. Цветом. При помощи этого метода были сделаны крупные открытия в области изучения пигментов, витаминов, гормонов, белков, ферментов и т. п.- Этот метод нашел применение при разделении, выделении и исследовании самых разнообразных веществ.
Принцип хроматографического метода состоит в том, что смесь веществ, растворенных в органическом растворителе, пропускают через вертикально поставленную стеклянную трубку, наполненную адсорбентом. В качестве адсорбентов применяют окись алюминия, кремневую кислоту, крахмал и т. д.
При пропускании через адсорбционную колонку вещества располагаются на различной высоте в зависимости от неодинаковой способности различных соединений адсорбироваться на поверхности веществ, используемых в качестве адсорбентов.
Окрашенные соединения образуют на различной высоте окрашенные зоны, поэтому этот метод был назван хроматографическим (греч. chroma — цвет, grapho — пишу).
Окраска говяжьего жира обусловлена присутствием пигмента — каротина, который может быть отделен от жира хроматографическим методом.
Адсорбционную колонку для извлечения каротина из говяжьего жира подготовляют следующим образом: стеклянную трубку длиной 40—50 см, диаметром 7—8 мм, суженную с одного конца, вставляют при помощи резиновой пробки в соединенную с водоструйным насосом колбу. Суженный конец трубки закрывают небольшим кусочком ваты для удержания адсорбента в трубке. Сухую окись алюминия (Al2O3 для хроматографии) насыпают в трубку слоем толщиной примерно 10 см и утрамбовывают стеклянной палочкой.
В качестве материала для исследования берут интенсивно окрашенный говяжий жир, из которого приготовляют 1 %-ный бензиновый раствор (применяется бензин с температурой кипения до 80°).
Окрашенный бензиновый раствор жира при помощи воронки наливают в адсорбционную колонку, после чего колбу присоединяют к водоструйному насосу. Бензиновый раствор жира следует периодически подливать в колонку, не допуская обнаружения поверхности адсорбента.
Устанавливают: отсутствие окраски бензинового раствора жира, вытекающего из колонки; появление окрашенной зоны в верхней части колонки, которая постепенно передвигается вниз.