Определение изоэлектрической точки белков

В изоэлектрической точке белки легче всего выпадают в осадок вследствие электронейтральности частиц. В этой точке выпадает самый большой осадок белка; по мере удаления от нее осадок делается меньше. По количеству осадка белка, выпавшего при различных значениях pH среды, можно установить изоэлектрическую точку данного белка.

Определение изоэлектрической точки казеина

Для определения изоэлектрической точки казеина приготовляют ряд пробирок с различными значениями pH; добавляют в каждую пробирку одинаковое количество раствора казеина.
Прибавив раствор казеина, пробирки встряхивают и через 5 мин. отмечают, в каких пробирках произошло помутнение или выпал осадок. Наибольший осадок выпадает в пробирке № 3, в пробирках № 2 и 4 — несколько меньший, в пробирках № 1 и 5 осадка и мути нет, следовательно, изоэлектрическая точка казеина находится при pH 4,7.
Для приготовления ряда пробирок с различными значениями pH следует пользоваться данными, приведенными в табл. 46.

Определение изоэлектрической точки белков

Приготовление раствора казеина. 0,2 г порошка казеина растворяют в мерной колбочке емкостью 50 мл при 40—50° на водяной бане в 5 мл 1N раствора уксуснокислого натрия с небольшим количеством дистиллированной воды. По окончании растворения и охлаждения добавляют воду до метки и получают слегка опалесцирующий раствор казеина в 0,1N растворе CH3COONa.

Определение изоэлектрической точки желатина

В пяти пробирках составляют буферные смеси по табл. 47. В каждую пробирку прибавляют по 1 мл 0,5%-ного раствора желатина и перемешивают. Затем прибавляют по 4 мл этилового спирта и немедленно вновь перемешивают.

Через 5 мин. сравнивают помутнение в пробирках и устанавливают, что оно наибольшее в пробирке № 3, наименьшее — в пробирках № 2 и 4 и отсутствует в остальных пробирках. Следовательно, изоэлектрическая точка желатина лежит при pH 4,7.

Реакции на полипептиды

Смесь полипептидов, полученная путем неглубокого гидролиза белков и затем высушенная, называется пептоном.
Для работы применяют 5%-ный раствор пептона в 5%-ном растворе хлористого натрия.
1. Устанавливают, что при кипячении раствор пептона не свертывается.
2. К 3 мл раствора пептона добавляют несколько капель крепкой азотной кислоты; появляется осадок, который растворяется при кипячении и вновь выпадает при охлаждении.
3. К 3 мл раствора пептона добавляют несколько капель уксусной кислоты и на кончике ножа кристаллический хлористый натрий. Появляется осадок, который растворяется при кипячении и вновь выпадает при охлаждении.
4. С раствором пептона проделывают биуретовую реакцию.
На основании этих реакций делают заключение, что промежуточные продукты распада белка полипептиды в отличие от белков не свертываются при кипячении; их осадки, образовавшиеся при действии азотной кислоты и поваренной соли в присутствии уксусной кислоты, растворяются при нагревании и вновь выпадают при охлаждении. Эти реакции позволяют отличить полипептиды от белков.