Реакция на наличие ферментов

Ферменты вырабатываются каждой живой клеткой. Присутствие ферментов в тканях и органах может быть доказано многочисленными реакциями.
Реакция на присутствие пепсина

Пепсин является протеазой, вырабатываемой слизистой оболочкой желудка. Расщепление белков пепсином происходит в кислой среде; оптимум действия его находится при pH 1,6-2,5.
Несколько нитей отмытого от крови фибрина, окрашенного кармином, помещают в пробирку, в которую добавляют 5—7 мл 1 %-ного раствора пепсина, приготовленного на 0,05 N соляной кислоте; пробирку выдерживают в водяной бане при 37° примерно полчаса. При этом наблюдают, что жидкость окрашивается в розовый цвет, а нити фибрина исчезают, превращаясь под действием пепсина в растворимые продукты распада белка.
При воздействии на фибрин прокипяченного раствора пепсина окрашивания раствора и исчезновения нитей не наблюдается, происходит только их набухание.
Работу можно проводить и с неокрашенным фибрином, но с окрашенным реакция получается более четко.
Реакция на наличие липазы

Липаза поджелудочной железы действует на жиры в слабощелочной среде, оптимум pH 8,0.
К 10 мл прокипяченного и охлажденного молока прибавляют одну каплю фенолфталеина, 0,1 мл глицериновой вытяжки из поджелудочной железы и немедленно прибавляют по каплям 1%-мый раствор двууглекислого натрия до получения слабо-розовой окраски. Пробирку помещают в водяную баню и через некоторое время устанавливают исчезновение розовой окраски, что происходит вследствие нейтрализации соды освободившимися под действием липазы жирными кислотами. Реакция среды из слабощелочной становится нейтральной или кислой, и фенолфталеин переходит из окрашенной формы в бесцветную.
Такую же работу проводят с прокипяченной глицериновой вытяжкой и убеждаются, что при выдерживании пробирки на водяной бане обесцвечивания не наблюдается.
Приготовление глицериновой вытяжки. 1. Глицериновую вытяжку можно приготовить из сухого порошка панкреатина путем обработки (настаиванием) порошка глицерином, разбавленным водой в отношении 2 : 1, в течение получаса; не-растворившуюся часть отфильтровывают.
2. Глицериновая вытяжка, содержащая липазу, может быть приготовлена также из свежей поджелудочной железы. Для этого поджелудочную железу свиней, крупного рогатого скота или баранов отделяют от жировой ткани, измельчают, растирают в ступке с промытым и прокаленным песком и экстрагируют водой или смесью воды с глицерином.
Свертывание казеина молока

Применяют раствор продажного пищевого пепсина. Чтобы показать, что при различных значениях активной реакции среды препарат пищевого пепсина может проявлять расщепляющее и свертывающее действие, используют тот же самый раствор пепсина, который применяли в работе по расщеплению фибрина.
Солянокислый раствор пепсина нейтрализуют едким натром по метилоранжу.
В пробирку вливают 10 мл молока, добавляют 1 мл нейтрализованного раствора пепсина и ставят пробирку в водяную баню при 37°. Через несколько минут наблюдают, что произошло свертывание молока.
Вместо пепсина для этой работы можно также использовать нейтрализованный желудочный сок и сычужный фермент, полученный путем экстракции водой сухих телячьих сычугов.
Такую же работу можно провести с прокипяченным нейтрализованным раствором пепсина, с тем чтобы убедиться в потере ферментативной активности при кипячении. В этом случае молоко не свертывается.
Реакции на наличие оксидаз

Под влиянием оксидаз происходят реакции окисления в присутствии молекулярного кислорода (кислорода воздуха).
Наиболее просто наблюдать действие оксидаз, содержащихся в растительных тканях. Поэтому работа проводится с оксидазой картофеля — тирозиназой,
а) Срез сырого картофеля смачивают 5%-ной спиртовой настойкой гваяковой смолы. Появление синей окраски объясняется окислением гваяковой кислоты, содержащейся в гваяковой смоле, под действием оксидазы за счет кислорода воздуха.
При нанесении раствора гваяковой смолы на срез вареного картофеля синяя окраска не образуется, так как ферменты инактивированы высокой температурой.
б) Верхний слой счищенного сырого картофеля измельчают, помещают в фарфоровую ступку и растирают сначала с песком, а затем с небольшим количеством воды. 2 мл отфильтрованной вытяжки из картофеля помещают в пробирку, куда добавляют 3 мл 0,1 %-ного раствора тирозина. Содержимое пробирки встряхивают и пробирку помещают в водяную баню при 37°.
Для лучшего соприкосновения раствора с кислородом воздуха пробирку периодически встряхивают. Жидкость в пробирке постепенно через 1—2 часа окрашивается в розовый, бурый и, наконец, в черный цвет.
Появление окраски обусловлено окислением тирозина под влиянием тирозиназы картофеля в присутствии кислорода воздуха в меланиноподобные вещества.