Спектроскопическое исследование гемоглобина и его производных

Сложный луч света, проходя через призму, разлагается на ряд простых лучей. Если принять эти лучи на экран, то получится изображение ряда цветных полос, т. е. спектр. Спектром называется упорядоченное расположение излучения по длинам волн.
При помощи спектроскопа — прибора для разложения дневного света — удобно наблюдать образование спектра.
Если на пути светового потока, попадающего в спектроскоп, поставить окрашенный раствор, он избирательно поглотит лучи определенной длины волны и в спектре на их месте будут видны темные полосы; получится спектр поглощения. Различные пигменты крови характеризуются различными спектрами поглощения (см. таблицу спектров). Чтобы было удобно указать участки спектра, в которых происходит поглощение, пользуются фраунгоферовыми линиями, обозначенными в таблице спектров буквами латинского алфавита.
Спектр оксигемоглобина HbO. Дефибринированную кровь разбавляют водой до содержания 0,5—0,1% оксигемоглобина. Пробирку с полученным раствором помещают перед щелью спектроскопа и наблюдают появление двух темных полос в участке спектра между линиями D и Е.
Спектр гемоглобина Hb. Гемоглобин (иногда его называют восстановленным гемоглобином) получают путем прибавления к раствору, приготовленному в предыдущей задаче, нескольких капель специального реактива.
По спектроскопу устанавливают, что две полосы, наблюдавшиеся в спектре оксигемоглобина, сливаются в одну широкую, характерную для гемоглобина.
Реактив для восстановления оксигемоглобина в гемоглобин получают путем растворения 7 г сернокислого железа и 14 г виннокаменной кислоты в 100 мл воды. Перед употреблением в раствор добавляют аммиак до слабощелочной реакции. Этот реактив можно заменить раствором сернистого аммония, но реакция восстановления протекает медленнее и иногда в спектре наблюдается дополнительная полоса поглощения.
Спектр метгемоглобина MHb. Дефибринированную кровь разводят дистиллированной водой в 5 раз и добавляют несколько капель свежеприготовленного насыщенного раствора железосинеродистого калия KaFe(CN)6. Реакцию производят при сильном встряхивании. В спектроскопе наблюдают появление трех темных полос: одну резкую в красной части спектра и две менее резкие между линиями D и E.