Гликолиз

Гликолиз состоит из большого числа реакций. Он протекает как в живых тканях, так и в тканях животного после смерти.
Наблюдать за реакциями гликолиза довольно сложно. Сравнительно просто можно установить накопление молочной кислоты, являющейся конечным продуктом гликолиза.
В качестве источника, содержащего весь комплекс ферментов гликолиза, используется мышечная кашица, которую готовят непосредственно перед опытом. Мышцу только что убитого животного мелко нарезают ножницами по возможности на холоду.
Обязательно ставят контрольную пробу для определения содержания молочной кислоты в мышечной кашице. Осаждение белков и прекращение ферментативных процессов достигается добавлением 15%-ного раствора метафоефорной кислоты.
В две пробирки, из которых первая является контрольной, наливают по 3 мл фосфатного буфера (pH 8,0). Затем в первую пробирку добавляют 1 мл дистиллированной воды и при перемешивании 2 мл 15%-ного раствора метафоефорной кислоты, а во вторую 1 мл 0,5%-ного раствора гликогена или крахмала.
В обе пробирки добавляют по 0,5 г мышечной кашицы и заливают слоем вазелинового масла, чтобы мышечная кашица не соприкасалась с кислородом воздуха. Обе пробирки выдерживают на водяной бане или в термостате в течение 2 час. при 37°.
По прошествии 2 час. во вторую пробирку добавляют при перемешивании 2 мл 15%-ного раствора метафосфорной кислоты. Содержимое пробирок отфильтровывают и переносят по 4 мл каждого фильтрата в чистые пробирки. Для осаждения углеводов в каждую пробирку добавляют по 0,35 г окиси кальция и 1 мл насыщенного раствора сернокислой меди. Содержимое каждой пробирки хорошо перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 30 мин., иногда перемешивая.
По прошествии 30 мин. осадок отфильтровывают, отмеривают из каждого фильтрата в две чистые пробирки по 0,5 мл и охлаждают на льду.
Осторожно, по каплям, из цилиндрика приливают крепкую серную кислоту по 1,5 мл в каждую пробирку. Обе пробирки выдерживают в кипящей водяной бане 4 мин., после чего на 2 мин. ставят их в лед.
В каждую пробирку прибавляют по четыре-пять капель расплавленного при 20° вератрола (диметилового эфира пирокатехина), осторожно встряхивают и оставляют на 20 мин.
Обе пробы окрашиваются в красный цвет: контрольная — в слабо-красный, за счет имевшейся в мышце молочной кислоты, а опытная — в интенсивно-красный, главным образом в связи с образованием в процессе гликолиза молочной кислоты.
Для приготовления фосфатного буфера с pH 8,0 смешивают 9,5 мл 1/15 M раствора Na2HPO4 с 0,5 мл 1/15 M раствора KH2PO4.
В случае необходимости работа может быть прервана перед осаждением углеводов.