Определение содержания азота методом изотермической перегонки

Содержание азота в белках можно определить методом изотермической перегонки.
Сущность этого метода сводится к вытеснению аммиака из растворов аммонийных солей сильными щелочами и поглощению его титрованной кислотой. Аммиак при определении содержания азота методом Кьельдаля можно отгонять путем изотермической перегонки. Для разложения аммонийных солей и поглощения аммиака применяют герметически закрытые стеклянные чашки Конвея (рис. 45).
Чашка Конвея представляет собой кристаллизатор с низкими стенками, в середину которого впаян сосуд такой же формы, только меньших размеров. Чашка плотно закрывается притертой стеклянной крышкой, смазанной вазелином или смесью вазелина и воска.
Титрованный раствор кислоты помещают во внутреннюю часть чашки, исследуемый раствор и щелочь — во внешнюю. В закрытой чашке аммиак, вытесняемый щелочью, поглощается кислотой.

Ход определения. Во внутреннюю часть чашки наливают 1 мл 0,01—0,03 N раствора серной кислоты; чашку ставят наклонно и во внешнюю часть наливают 1—2 мл испытуемого раствора так, чтобы он не растекался по всей поверхности. После этого чашку ставят горизонтально, прикрывают крышкой, оставив небольшое отверстие, через которое вносят 1—2 мл насыщенного раствора углекислого калия или 10% едкого натра. Чашку тотчас плотно закрывают крышкой и осторожными круговыми движениями перемешивают ее содержимое. Затем ее ставят на 2 часа в термостат при 37° или оставляют при комнатной температуре на 24 часа. После этого во внутреннюю часть добавляют одну-две капли индикатора и титруют 0,005 N раствором едкой щелочи до появления зеленой окраски.
Для учета количества аммиака в воде и реактивах ставят параллельно контрольные пробы, где вместо испытуемого раствора берут дистиллированную воду.
По разности в количестве щелочи, пошедшем на титрование контрольной и опытной проб, рассчитывают количество азота в исследуемом растворе.
Пример. На титрование контрольной пробы израсходовано 1,85 мл 0,005 N раствора щелочи, на титрование опытной пробы 1,53 мл; связалось с аммиаком 1,85—1,53=0,32 мл; 1 мл 0,005 N щелочи эквивалентен 0,07 мг азота. Следовательно, 0,07 мг*0,32=0,0224 мг азота.
Для перевода азота на белок сначала вычитают из величины общего азота величину, соответствующую небелковому азоту, содержащемуся в тканях; остаток умножают на коэффициент 6,25. Для мышечной ткани величина небелкового азота в среднем составляет 0,35%.

Приготовление индикатора

Основной раствор: 40 мл 0,1%-ного спиртового раствора метилрота + 10 мл 0,1%-ного спиртового раствора метиленовой сини.
Рабочий раствор: 1 объем основного раствора + 1 объем спирта + 2 объема воды.
Этим же индикатором можно пользоваться при определении азота по методу Кьельдаля.