Определение активности актомиозина по Баленовичу и Штраубу

Активностью актомиозина называется содержание в нем актина. Если актомиозин растворить в 0,6 M KCl при pH 7 и добавить к раствору 0,035% АТФ, то он диссоциирует на составные компоненты. Тогда величина вязкости раствора будет равняться сумме величин вязкости соответствующих по концентрации растворов миозина и актина. Разница в величине вязкости до и после добавления АТФ будет характеризовать активность испытуемого актомиозина.
Белки фракции актомиозина из мышечной ткани экстрагируют по вышеописанному методу. В отдельной порции экстракта определяют содержание в нем актомиозина весовым методом. Для осаждения испытуемого актомиозина берут такое количество экстракта, чтобы можно было в дальнейшем получить 15 мл раствора, содержащего около 1 мг актомиозина в 1 мл. Осаждают также по указанному методу. Затем к испытуемому осадку добавляют 0,6 M раствор KCl, имеющий pH 7,0 (для этого мы употребляли боратный буфер). К 4 мл испытуемого раствора добавляют 2 мл 0,6 M KCl и смесь помещают в модифицированный вискозиметр Оствальда (диаметр капилляра 0,060 см, длина капилляра 210 мм, диаметр цилиндрического резервуара 1,65 см, количество вытекающей жидкости 1,2—1,7 мл/мин) и определяют вязкость при 0° С.
После этого к другой 4 миллилитровой порции испытуемого раствора добавляют раствор, содержащий 2 мл раствора АТФ (pH 7,0), и вновь определяют вязкость.
Относительная вязкость выражается отношением времени истечения белкового солевого раствора к времени истечения раствора соли той же концентрации.
Для определения процента активности находим на кривой, представленной на рис. 78, какое падение специфической вязкости в присутствии АТФ дает раствор миозина В, одинаковый по концентрации с испытуемым раствором актомиозина.
Определение активности актомиозина по Баленовичу и Штраубу

Разность вязкости испытуемого раствора до и после прибавления АТФ, умноженная на 100 и деленная на разность вязкости соответствующего по концентрации миозина В, показывает процент активности испытуемого актомиозина.
Однако при изучении динамики данного показателя в процессе созревания мяса вычисление процентного содержания актина в актомиозине может и не производиться, так как величина падения вязкости растворов актомиозина после добавления к ним АТФ может служить достаточным критерием степени ассоциации миозина с актином.
Головкин и Першина установили, что погрешность данного метода очень незначительна и находится в пределах 1—2%. при двух-трех параллельных определениях.